康寧/Corning CellGro® 澳洲來(lái)源胎牛血清 (康寧)

康寧/Corning® 淋巴細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基

血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。胎牛血清取自剖腹產(chǎn)的胎牛，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。目前實(shí)驗(yàn)室用胎牛血清產(chǎn)品種類(lèi)繁多，本專(zhuān)題介紹了幾個(gè)常用品牌的胎牛血清產(chǎn)品以及其在使用中常見(jiàn)的一些問(wèn)題，希望能給大家?guī)?lái)一定幫助!

                      一、胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)、成分及其功能

簡(jiǎn)介：在常規(guī)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中所用到的細(xì)胞培養(yǎng)基往往需要加入胎牛血清。蛋白質(zhì)是牛血清的主要成分，它對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)起到關(guān)鍵的作用。我們常常聽(tīng)說(shuō)的還有小牛血清，那么胎牛血清和小牛血清有沒(méi)有區(qū)別？它們的不同點(diǎn)又在哪里呢？本文檔明確定義了什么樣的血清才是標(biāo)準(zhǔn)的胎牛血清，也說(shuō)明了胎牛血清的功能到底有哪些？

胎牛血清

一、胎牛血清

各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)符合2005版《中華人民共和國(guó)藥典》第三部附錄的要求。

1、性狀、外觀 淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。

2、蛋白質(zhì)含量 3.5%～5.0%( w/v)

3、血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)

4、無(wú)菌檢驗(yàn)　陰性

5、支原體檢驗(yàn)　陰性

6、細(xì)菌內(nèi)毒素 ≤5(EU/ml)

7、牛腹瀉病毒 陰性

8、大腸桿菌噬菌體 陰性

9、支持細(xì)胞增殖(Sp2/0-Ag14)　生長(zhǎng)曲線(接種濃度)最大增殖濃度≥2.5×106 個(gè)/ml

細(xì)胞倍增時(shí)間 ≤15h

克隆率 ≥85%

二、血清的主要成分

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。

胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。

顯然，胎牛血清是品質(zhì)最高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。

三、功能

牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。

1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。

2. 提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。

5.起酸堿度緩沖液作用。

6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)、成分及其功能

                                 二、小牛血清和胎牛血清的區(qū)別

摘要：

胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

1、來(lái)源不同：

胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng)，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。　　血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過(guò)一個(gè)月。解凍血清時(shí) ，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，絕對(duì)不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會(huì)增加，血清在解凍和熱滅活后，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

2、胎牛血清，小牛血清和新生牛血清三種之間的區(qū)別：

這三種血清的成份，總體沒(méi)有什么明顯差別，只是有一些成分與其生存環(huán)境有關(guān)，如上述有人說(shuō)的抗體很等少。此外，因生長(zhǎng)發(fā)育的需要，有些成分在小牛出生后會(huì)發(fā)生一些變化。不過(guò)還沒(méi)有搞清楚它與其它的血清之間的差別。有一點(diǎn)可以肯定，胎牛血清中的部分功能蛋白與小牛血清中的含量有差別。

3、最為重要的一點(diǎn)是：

胎牛本身生活在一個(gè)潔凈環(huán)境當(dāng)中，其血清與外界隔絕，只要生產(chǎn)工藝科學(xué)規(guī)范，其質(zhì)量肯定要比后兩者好。

4、根據(jù)牛出生時(shí)間和血清采制分離方法分為：

（1）胎牛血清：八月齡胎牛心臟穿刺取血;

（2）新生牛血清：出生12-24小時(shí)新生牛靜脈采血;又可細(xì)分為：a.高級(jí)新生牛血清：采血后靜置自然析出的血清;b.標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清：c.經(jīng)離心分離的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清;

（3）小牛血清：出生三月齡小牛動(dòng)脈采血分離血清;

血清是血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。對(duì)血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展，但仍存在一些問(wèn)題。

胎牛血清是品質(zhì)最高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。

一般選用血清種類(lèi)可以根據(jù)ATCC及實(shí)驗(yàn)需要來(lái)選擇

其實(shí)，除了一些比較嬌貴的細(xì)胞，如干細(xì)胞之類(lèi)的，其余的大部分細(xì)胞培養(yǎng)，用國(guó)產(chǎn)的足以!而且四季青之類(lèi)的口碑也頗好，性能也比較穩(wěn)定，所以很多實(shí)驗(yàn)室都在用。拋開(kāi)法好一點(diǎn)的文章來(lái)說(shuō)，這是個(gè)明智的選擇。如果想做好文章，那就要和國(guó)際接軌了，燒一點(diǎn)錢(qián)，影響因子提高點(diǎn)，也值啊!

                              三、胎牛血清產(chǎn)品等級(jí)介紹

摘要：

本文將胎牛血清分成五個(gè)級(jí)別，并詳細(xì)介紹各級(jí)別的血清產(chǎn)品和特點(diǎn)。

第一類(lèi)，最高級(jí)別，是專(zhuān)門(mén)用于干細(xì)胞的特級(jí)胎牛血清

1、Hyclone的特級(jí)胎牛血清

目前，性能最好的血清，還是要說(shuō)說(shuō)Hyclone的特級(jí)胎牛血清，貨號(hào)是SH30070.03，它是Hyclone的“招牌菜”。

Hyclone特級(jí)胎牛血清(Defined FBS)，貨號(hào)SH30070，是世界上唯一經(jīng)過(guò)40納米過(guò)濾的頂級(jí)胎牛血清，極佳的促細(xì)胞生長(zhǎng)作用及產(chǎn)品穩(wěn)定性。內(nèi)毒素含量≤10EU/ml，血紅蛋白含量≤10mg/dl。

此血清可以廣泛用于各種細(xì)胞培養(yǎng)，包含任何干細(xì)胞系的培養(yǎng)。

因?yàn)槊绹?guó)那邊有瘋牛病，無(wú)法進(jìn)口。實(shí)際上，40nm的過(guò)濾，已經(jīng)將全部的病毒、支原體處理掉，同時(shí)，是用于科研級(jí)別的，潔凈程度非常高。不讓進(jìn)口，只是我們國(guó)家為了保護(hù)本國(guó)畜牧業(yè)的一個(gè)手段，針對(duì)牛肉方面，而胎牛血清是受到殃及而已。

2、Gibco的特級(jí)胎牛血清

稍次一點(diǎn)的是Gibco公司在美國(guó)原裝生產(chǎn)的特級(jí)胎牛血清，這款血清，貨號(hào)是16000-044，是100nm過(guò)濾3次，內(nèi)毒素和血紅蛋白含量都可以與Hyclone的SH30070.03相媲美。也可以用于培養(yǎng)大部分的干細(xì)胞系。同樣是美國(guó)來(lái)源，所以渠道特殊。

3.TCB的特級(jí)胎牛血清

TCB(Tissue Culture BioLogicals)公司作為一家生物行業(yè)類(lèi)的著名供應(yīng)商，成立于1978年，大部分血清的采集和加工都在加利福尼亞。每一批的原材料都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格篩選，所有的產(chǎn)品都在FDA認(rèn)證的cGMP車(chē)間進(jìn)行!

TCB 公司一貫重視產(chǎn)品質(zhì)量，為客戶(hù)提供最優(yōu)質(zhì)的血清及相關(guān)產(chǎn)品，經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展，公司產(chǎn)品種類(lèi)豐富，各種品質(zhì)的血清和培養(yǎng)基能滿足所有實(shí)驗(yàn)室的需求。

TCB 公司經(jīng)過(guò)美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)和美國(guó)農(nóng)業(yè)部(USDA)的授權(quán)認(rèn)證。與人相關(guān)的產(chǎn)品符合疾控中心(CDC)的相關(guān)法規(guī)。

TCB是美國(guó)農(nóng)業(yè)部(USDA)動(dòng)植物檢疫局(APHIS)獸醫(yī)處(VS)下屬的國(guó)家動(dòng)物進(jìn)出口中心(NCIE)的檢疫認(rèn)可單位，允許可控原材料、組織、細(xì)胞等的進(jìn)出口貿(mào)易!

4. Bioind特優(yōu)級(jí)胎牛血清

血源來(lái)自北美和澳大利亞BioInd公司的生產(chǎn)完全符合GMP的要求，并通過(guò)ISO9000:2001和ISO 13485:2003質(zhì)量認(rèn)證。

以安全，穩(wěn)定，高效為原則的BioInd公司，所有的產(chǎn)品質(zhì)量均完全符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。Biological Industries主營(yíng)細(xì)胞培養(yǎng)類(lèi)產(chǎn)品，BioInd工廠加工的胎牛血清均符合USDA標(biāo)準(zhǔn)及歐洲標(biāo)準(zhǔn)血清。根據(jù)美國(guó)農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)，原始血清均采自未發(fā)生瘋牛病(BSE)和口蹄疫(FMD)疫情的國(guó)家。Biological Industries三步濾菌處理法，最后的過(guò)濾步驟為連續(xù)通過(guò)三個(gè)100納米的濾膜。血清生產(chǎn)的潔凈級(jí)別為100級(jí)。所有分裝工作臺(tái)都通過(guò)高效微粒空氣過(guò)濾器過(guò)濾，并保持正壓分裝環(huán)境要對(duì)總微粒、懸浮微粒數(shù)和壓力進(jìn)行監(jiān)控。分裝之后，終產(chǎn)品迅速-20度凍存，并隔離，直到所有的質(zhì)量控制檢測(cè)完成.

第二類(lèi)，優(yōu)等胎牛血清

給您推薦幾款，如下：

1、Hyclone的加拿大優(yōu)等胎牛血清

性?xún)r(jià)比最高的是Hyclone加拿大優(yōu)等胎牛血清(CharacterizendFBS)SH30396.03 血清采自加拿大，由hyclone公司總部的員工采集加工，采集方法，加工過(guò)程，檢定標(biāo)準(zhǔn)與美國(guó)原產(chǎn)優(yōu)等胎牛血清完全一致，市場(chǎng)價(jià)格低于美國(guó)原產(chǎn)的。經(jīng)過(guò)3次100nm過(guò)濾，內(nèi)毒素含量≤25EU/ml，血紅蛋白含量≤25mg/dl

2、Hyclone的南美優(yōu)級(jí)胎牛血清

大體與加拿大的優(yōu)等血清是一樣的，級(jí)別也非常相似，貨號(hào)是sv30087.02，該胎牛血清來(lái)源于南美洲，以封閉的心臟穿刺方式采集，產(chǎn)品經(jīng)3次100nm 過(guò)濾，經(jīng)嚴(yán)格檢測(cè)確保無(wú)支原體，細(xì)菌病毒檢測(cè)依據(jù)美國(guó)藥典(USP)和美國(guó)聯(lián)邦法規(guī)第九篇(9CFR)，內(nèi)毒素含量≤10 EU/ml，血紅蛋白含量≤20 mg/dl，完全符合美國(guó) HyClone® 優(yōu)等胎牛血清的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

3、Gibco的澳大利亞胎牛血清

情況和Hyclone的澳大利亞胎牛血清差不多，市場(chǎng)價(jià)也是3200元/500ml左右。

這一級(jí)別的血清，也能用于干細(xì)胞培養(yǎng)，可是，不象特級(jí)胎牛血清那么優(yōu)秀。

因?yàn)?，此胎牛血清屬于澳大利亞生產(chǎn)的，不在疫區(qū)，可以正常報(bào)關(guān)進(jìn)口，目前沒(méi)有受到任何影響，所以，就目前而言，算是最好的胎牛血清了，有不少客戶(hù)都此血清來(lái)培養(yǎng)干細(xì)胞，效果還是比較不錯(cuò)。

4、TCB的優(yōu)級(jí)胎牛血清

情況和Hyclone的澳大利亞胎牛血清差不多，市場(chǎng)價(jià)也是2300元/500ml左右。

這一級(jí)別的血清，也能用于干細(xì)胞培養(yǎng)，可是，不象特級(jí)胎牛血清那么優(yōu)秀。

第三類(lèi)，一般級(jí)別的進(jìn)口胎牛血清

1、Hyclone的南美胎牛血清

目前，市場(chǎng)上用的最多的Hyclone血清是南美胎牛血清(FBS)SV30087 ，此血清采自南美，在國(guó)內(nèi)(蘭州)過(guò)濾并測(cè)試檢驗(yàn)，經(jīng)三次100納米過(guò)濾，根據(jù)中國(guó)商標(biāo)法的規(guī)定標(biāo)貼中文標(biāo)簽，內(nèi)毒素含量≤10EU/ml,血紅蛋白含量≤20mg/d。

此血清廣泛用于各種腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，還沒(méi)有資料記載能夠用于干細(xì)胞，也聽(tīng)說(shuō)有少數(shù)人用于干細(xì)胞培養(yǎng)的，不過(guò)，因?yàn)楸旧硌t素比較高，所以，最好不要用于干細(xì)胞，

2、Gibco的南美胎牛血清

這款血清，是Gibco針對(duì)Hyclone南美胎牛血清做的，價(jià)格比較貴，好像是1780元/500m。

3、Gemini的胎牛血清

4、TCB的胎牛血清

5、PAA的胎牛血清

6、JRH澳洲胎牛血清

第四類(lèi)，國(guó)產(chǎn)的各種系列胎牛血清

國(guó)產(chǎn)的胎牛血清，國(guó)內(nèi)沒(méi)有嚴(yán)格意義的胎牛血清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而國(guó)內(nèi)都是剖腹產(chǎn)出胎牛，8小時(shí)左右取血，然后，進(jìn)行過(guò)濾分裝。

所以，國(guó)產(chǎn)的胎牛血清不是嚴(yán)格意義的胎牛血清。

價(jià)格便宜但是遇到的問(wèn)題非常多。

第五類(lèi)，其他血清

依科賽，思洳，超級(jí)新生牛血清，可以用于簡(jiǎn)單的細(xì)胞培養(yǎng)。

                              四、胎牛血清使用中的常見(jiàn)問(wèn)題

摘要：

文章介紹了儲(chǔ)存和解凍血清方法;血清中包含絮狀沉淀怎么處理;實(shí)驗(yàn)室如何選擇適合的血清等選擇和使用血清時(shí)的常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)。

1、 如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清，并避免反復(fù)凍融。

我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會(huì)自然消失。

3、實(shí)驗(yàn)室如何選擇適合的血清?

國(guó)內(nèi)一致認(rèn)為HYCLONE的血清是最好的，但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷，國(guó)外一般認(rèn)為GIBCO比HYCLONE好，所以并不是價(jià)格決定質(zhì)量，但是總的來(lái)說(shuō)這兩種價(jià)格普遍偏貴，一般不是太嬌氣的細(xì)胞，國(guó)產(chǎn)的就夠用了。此外，由于國(guó)內(nèi)HYCLONE，GIBCO并沒(méi)有生產(chǎn)線，我們只能從代理商那里買(mǎi)，而代理商又魚(yú)龍混雜，所以買(mǎi)到假貨的可能性也很大。所以，我一般會(huì)從直銷(xiāo)員那里買(mǎi)血清，有的國(guó)外生物公司由于剛剛進(jìn)入中國(guó)，知名度不高，但是其實(shí)在國(guó)外已經(jīng)做得很不錯(cuò)了，如Wisent等，他們?cè)趪?guó)內(nèi)有辦事處，我會(huì)從那里拿，血清的品質(zhì)和HYCLONE不相上下，但價(jià)格相對(duì)優(yōu)惠很多。

4、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

(1)解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

(2) 血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。

5、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎?

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_(kāi)始降解。

6、 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

7、 有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或完全沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!

8、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?

一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒(méi)有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：

(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老，破碎的細(xì)胞殘骸;

(2)血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果;

(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng);

(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱?yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn);

(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

9、 細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

(2) 培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。

(3) 培養(yǎng)基保持最佳PH值7.0- 7.2。

(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。

(5) 掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。

10、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?

來(lái)源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng)，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過(guò)一個(gè)月。解凍血清時(shí) ，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，絕對(duì)不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會(huì)增加，血清在解凍和熱滅活后，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

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