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無(wú)血清造血細(xì)胞培養(yǎng)基http://www.fzy888.com/a/gb2312/info/2013/0413/5029.html

 lonza 12-725F無(wú)血清培養(yǎng)基http://www.fzy888.com/a/gb2312/gongsixinxi/shichanghuodong/2014/0514/5157.html

本人之前總結(jié)的，Hela細(xì)胞傳代步驟。零經(jīng)驗(yàn)的新手們看看參考參考吧，老手們也多提些意見(jiàn)，以利改進(jìn)。

Hela細(xì)胞確實(shí)比較好養(yǎng)，出點(diǎn)小差錯(cuò)也不會(huì)死，確實(shí)是新手開(kāi)始練習(xí)培養(yǎng)細(xì)胞的比較好的選擇。

廢話不多講，進(jìn)入正題：

1、75%乙醇擦手，取離心管一個(gè)，打開(kāi)超凈臺(tái)（照明、風(fēng)機(jī)），把離心管置于架子上。然后用75%乙醇擦一下臺(tái)面，點(diǎn)燃酒精燈。

2、取尖吸管、吸量管各一支，套好吸球，放置在專用的架上。

3、從冰箱中取出胰酶、PBS（或者versene）、培養(yǎng)基?？梢园岩让负蚉BS（versene）的瓶蓋打開(kāi)或者擰松。

4、取待傳代的細(xì)胞

5、用尖吸管棄去舊的培養(yǎng)基，吸量管加入PBS（versene），然后將PBS（versene）瓶收起來(lái)。

6、用尖吸管洗一下細(xì)胞，然后將PBS（versene）棄掉；用吸量管吸取適量胰酶加入。棄掉吸量管。

7、將細(xì)胞放入37度孵箱。將胰酶和PBS（versene）瓶放入4度。

8、取一支吸量管，吸取適量培養(yǎng)基加入離心管。

9、取細(xì)胞，鏡下觀察消化情況。消化程度合適之后，用尖吸管棄去胰酶，取離心管中的培養(yǎng)基加入細(xì)胞，吹打，至所有細(xì)胞從培養(yǎng)皿底部脫落下來(lái)，然后吸取至離心管中，800 rpm離心5分鐘。

10、吸量管吸取適量培養(yǎng)基加入新的培養(yǎng)皿中。將培養(yǎng)基收至4度保存。棄掉吸量管。

11、細(xì)胞離心畢，尖吸管棄去上清，吸取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基適量，加入離心管，將細(xì)胞重懸、吹勻。

12、細(xì)胞懸液加入新的培養(yǎng)皿中。鏡下觀察，搖勻，放入37度孵育。收超凈臺(tái)。

以上是本人傳代Hela細(xì)胞的步驟?？傆?jì)使用1根尖吸管、2根吸量管，還是比較節(jié)省的。其中一些細(xì)節(jié)，例如液體加入的具體量、細(xì)胞傳代的比例，大家按情況，沒(méi)有定值。

另外，versene對(duì)細(xì)胞有毒性，且不能被血清中和，必須離心去除。如果用PBS洗細(xì)胞，可不用離心。 

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