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技術(shù)簡(jiǎn)介： TAP/MS是由Co-IP/MS以及GST Pull down-MS發(fā)展而來，三者在尋找鑒定目標(biāo)蛋白的相互作用蛋白的原理以及方法上非常相似，流程以及效果都要優(yōu)于酵母雙雜交方法。但是，TAP/MS方法經(jīng)過兩步親和純化，而Co-IP/MS以及GST Pull down-MS都只是一步親和純化，所以TAP/MS相比可以有效減少非特異性蛋白的結(jié)合，假陽性率更低。
基本流程： 構(gòu)建含有目的基因的載體，使目的基因與2個(gè)不同的表位標(biāo)簽融合表達(dá)，如Flag、HA、Strep、His、CBP、SBP等等。安提海拉生物科技有限公司采用N端 2*strep tag+Flag tag或者C端 6*His tag+Flag tag雙標(biāo)簽載體；載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞并表達(dá)融合蛋白“2*strep-Flag –目標(biāo)蛋白”或“6*His-Flag–目標(biāo)蛋白”；細(xì)胞裂解提取總蛋白，經(jīng)streptactin beads或Nickelbeads和Flag M2 beads的兩步純化和洗脫，更大限度了去除了假陽性蛋白。洗脫液進(jìn)入質(zhì)譜儀，分析鑒定與目標(biāo)蛋白具有相互作用的蛋白。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)： 1. TAP/MS得到的相互作用蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與目標(biāo)蛋白結(jié)合的，符合體內(nèi)真實(shí)生理情況，得到的結(jié)果可信度高。 2.該方法純化條件溫和，不會(huì)破壞弱的相互作用，故能得到更多的具有生理意義的相互作用蛋白。 3.采用兩步純化，可以有效的減少非特異蛋白的結(jié)合，并避免因過度沖洗而產(chǎn)生的復(fù)合體解離。 4.有兩端標(biāo)簽可供選擇，避免某端帶上標(biāo)簽后功能喪失，擴(kuò)寬了TAP/MAāS使用范圍。
技術(shù)路線：
慢病毒載體信息：
實(shí)驗(yàn)流程圖：
服務(wù)內(nèi)容: 1.構(gòu)建融合N端 2*strep tag+Flag tag或者C端 6*His tag+Flag taāg的目標(biāo)蛋白真核表達(dá)載體或者病毒載體。 2.載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞或包裝病毒感染靶細(xì)胞。 3.Strep-Flag或6*His-Flag兩步分別純化目標(biāo)蛋白復(fù)合體。 4.LC-MS-MS鑒定與目標(biāo)蛋白相互作用的已知或未知蛋白。
北京畢特博生物技術(shù)有限責(zé)任公司 http://www.fzy888.com 400熱線：400-833-9299 電話：010-82015225 傳真：010-62015131 聯(lián)系人：陳娉樺 QQ:358411186 E-mail:chenph1989@163.com
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