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產(chǎn)品介紹:

DH5α Chemically Competent Cell

發(fā)布時(shí)間: :2020-08-24 20:47 瀏覽次數(shù): :
產(chǎn)品介紹:
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詳細(xì)說(shuō)明:

 DH5α Chemically Competent Cell 使用說(shuō)明書

產(chǎn)品說(shuō)明:

本品為DH5α感受態(tài)細(xì)胞,缺失核酸內(nèi)切酶 (endA),且為重組酶缺陷型(recA),有利于高純度質(zhì)粒DNA的提取,同時(shí)減少插入片段的同源重組概率,確保插入DNA的穩(wěn)定性,為質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、基因克隆提高保障。 lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍(lán)白斑篩選。DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>5×108 cfu/μg

 產(chǎn)品組成:

  

BW-002-a 

BW-002-b 

 DH5α Chemically Competent Cell

10 × 100 µL

50× 100 µL

pUC19control vector,10pg/μL

10μL

10μL

 

 

 

 

 

* 基因型F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

儲(chǔ)存條件:

-80℃±10℃保存6個(gè)月。請(qǐng)勿將本品置于-20℃或液氮中保存。

使用方法:

1.       將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃冰箱中取出,置于冰水浴中融化。

2.       將目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)加入到100μL感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕彈勻,冰上孵育30分鐘。

3.       42℃水浴熱激45秒后,立刻置于冰上,靜置23分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

4.       向離心管中加入200μL無(wú)抗LBTBSOC培養(yǎng)基,混勻后于220rpm37℃搖床振蕩復(fù)蘇60分鐘,使轉(zhuǎn)化物表達(dá)抗性基因。

5.       根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求吸取適量菌液,涂布至相應(yīng)抗生素的2YTLB培養(yǎng)基上,室溫正置10分鐘,待菌液被平板充分吸收后,37℃倒置培養(yǎng)過(guò)夜。

 

注意事項(xiàng):

1.       感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目的DNA,不可在冰上放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2.       待轉(zhuǎn)化DNA加入體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10。

3.       待轉(zhuǎn)化DNA加入感受態(tài)細(xì)胞后,請(qǐng)勿用移液槍吹打,輕輕彈勻即可。

4.       為確保最高效率轉(zhuǎn)化,整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)盡量輕柔,并保持冰上操作。

 

DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞使用說(shuō)明書

 

 

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