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XL10-Gold Chemically Competent Cell

發(fā)布時間: :2020-08-24 20:51 瀏覽次數: :
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詳細說明:

 XL10-Gold Chemically Competent Cell 使用說明書

產品說明:

XL10-Gold是目前轉化效率最高的感受態(tài)細胞,由Stratagene開發(fā)的特異性用于大質粒或珍貴連接產物轉化或構建文庫的超級感受態(tài)細胞。XL10-Gold菌株為Hte(high transformation efficiency)基因型,HteStratagene開發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉化效率及大質粒轉化能力的宿主菌基因型,已成功應用于40kd質粒的構建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統(tǒng);同時缺失核酸內切酶(endA),提高了質粒DNA的產量和質量;重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA的穩(wěn)定性;TetR CamR賦予菌株四環(huán)素和氯霉素抗性;lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍、白斑篩選。XL10-Gold感受態(tài)細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>2×109 cfu/μg。

產品組成:

  

 

 

 XL10-Gold Chemically Competent Cell

10 × 100 µL

50× 100 µL

pUC19control vector10pg/μL

10μL

10μL

 

 

 

* 基因型:TetΔ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F? proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR]

 

儲存條件:

-80℃±10℃保存6個月。請勿將本品置于-20℃或液氮中保存。

 

使用方法:

1.       將感受態(tài)細胞從-80℃冰箱中取出,置于冰水浴中融化。

2.       將目的DNA(質?;蜻B接產物)加入到100μL感受態(tài)細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育30分鐘。

3.       42℃水浴熱激35秒(非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds or for >40 seconds.),立刻置于冰上,靜置23分鐘,晃動會降低轉化效率。

4.       向離心管中加入200μL無抗LBTBSOC培養(yǎng)基,混勻后于220rpm37℃搖床振蕩復蘇60分鐘,使轉化物表達抗性基因。

 

5.       根據實驗要求吸取適量菌液,涂布至相應抗生素的2YTLB培養(yǎng)基上,室溫正置10分鐘,待菌液被平板充分吸收后,37℃倒置過夜培養(yǎng)。

 

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