XL10-Gold Chemically Competent Cell 使用說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品說(shuō)明：
XL10-Gold是目前轉(zhuǎn)化效率最高的感受態(tài)細(xì)胞，由Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性用于大質(zhì)?；蛘滟F連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化或構(gòu)建文庫(kù)的超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞。XL10-Gold菌株為Hte(high transformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力的宿主菌基因型，已成功應(yīng)用于40kd質(zhì)粒的構(gòu)建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統(tǒng)；同時(shí)缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；TetR， CamR賦予菌株四環(huán)素和氯霉素抗性；lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍(lán)、白斑篩選。XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>2×109 cfu/μg。
產(chǎn)品組成：
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組 分
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XL10-Gold Chemically Competent Cell
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10 × 100 µL
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50× 100 µL
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pUC19（control vector，10pg/μL）
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10μL
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10μL
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* 基因型：TetR Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F? proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR]
儲(chǔ)存條件：
-80℃±10℃保存6個(gè)月。請(qǐng)勿將本品置于-20℃或液氮中保存。
使用方法：
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃冰箱中取出，置于冰水浴中融化。
2. 將目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）加入到100μL感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育30分鐘。
3. 42℃水浴熱激35秒（非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds or for >40 seconds.），立刻置于冰上，靜置2～3分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
4. 向離心管中加入200μL無(wú)抗LB、TB或SOC培養(yǎng)基，混勻后于220rpm，37℃搖床振蕩復(fù)蘇60分鐘，使轉(zhuǎn)化物表達(dá)抗性基因。
5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求吸取適量菌液，涂布至相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上，室溫正置10分鐘，待菌液被平板充分吸收后，37℃倒置過(guò)夜培養(yǎng)。
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